To tylko jedna z 5 stron tej notatki. Zaloguj się aby zobaczyć ten dokument.
Zobacz
całą notatkę
Laboratorium 7. Barwienie bakterii
Testujemy / hodujemy nieznaną bakterię : 1. Opisujemy, jak rośnie w podłożu płynnym; 2. Robimy posiew redukcyjny; 3. Wykonujemy barwienie metodą Grama;
Barwienie drobnoustrojów mureina - podstawa ściany komórkowej u większości bakterii; 2 półświaty bakterii w oparciu o barwienie metodą Grama: GRAMDODATNIE: barwią się na ciemny kolor (niebieskofioletowy, może wyglądać jak czarny pod mikroskopem) - mają grubą warstwę mureiny, która zatrzymuje w komórce kompleks fioletu krystalicznego i płynu Lugola; GRAMUJEMNE: mało mureiny, więc etanol wypłuka fiolet i komórka przyjmie drugi barwnik- fuksynę; GRAMDODATNIE: Zdecydowana większość ziarniaków (kulkowate bakterie), zwykle nazwy rodzajowe ziarniaków kończą się na -coccus; przykłady: Staphylococcus aureus (gronkowiec złocisty) - w koloniach tworzy grona :
Micrococcus Luteus (żółty ziarniak) - pakietowiec: paciorkowce, np. Streptococcus Pyogenes (angina) Inne ziarniaki, np. Neisseria gonorrhoeae (dwoinka rzeżączki) nie barwi się na fioletowo, tylko na czerwono. Wszystkie laseczki sa gramdodatnie (zawsze też są przetrwalnikujące): 2 rodzaje: - tlenowe, np. Bacillus Subtilis (laseczka sienna) Bacillus Cereus (laseczka woskowa) - wytwarza toksyny, lubi żyć w ryżu, może powodować biegunkę; -beztlenowe, tu jeden ważny rodzaj: Clostridium, np. Clostridium Botulinum (laseczka jadu kiełbasianego) - najsilniejsza trucizna świata (z odkrytych do tej pory), działa na przekaźniki nerwowe (przestają być przekazywane sygnały przestają pracować mięśnie umiera się na skutek uduszenia); inne zastosowanie: botoks (trzeba go powtarzać co jakiś czas, bo organizm rozkłada truciznę); Clostridium Perfringens (laseczka zgorzeli gazowej) - gangrena (martwica spowodowana odmrożeniem/ zranieniem, głównie dotyczy otwartych ran zabrudzonych ziemią); wytwarza bardzo dużo produktów gazowych, dlatego (zwykle) kończyna puchnie do ogromnych rozmiarów i tkanki pękają amputacja (jeśli stan jest bardzo wczesny [kilka godzin!] to można stosować antybiotyki);
GRAMUJEMNE: Większość pałeczek, np.: - Escherichia Coli - Serratia Marcescens - Salmonella Typhi (pałeczka salmonellozy) - Shigella (pałeczka czerwonki) - Klebsiella Ozoenae (wchodzi np. do nosa traci się węch na zawsze) Grupa Pseudomonas (piękne kolory- od szmaragdów po zielenie), np. Pseudomonas aeruginosa (pałeczka ropy błękitnej) - błękitnoszmaragdowa, ważna i wredna - nic na nią nie działa, jest bardzo oporna, powoduje poważne zakażenia w szpitalach; powoduje długoletnie zapalenia zatok; Pseudomonas Fluorescens - biodegradacja gruntów (usuwanie zanieczyszczeń z gleb i wód - biotechnologiczne usuwanie ropopochodnych, także P. putida); Pseudomonas Putida; rozpyla się je, ponieważ jedzą wszystko (usuwają mnóstwo szkodliwych, antropogenicznych zanieczyszczeń), łatwo się adaptują, ale ciężko je zabić, grupa ważna biotechnologicznie (antybiotyki i bioremediacja);
(…)
… przybierają wtedy postac wielkich kul). Mała zdolność bakterii do załamywania promieni świetlnych słaba widoczność pod mikroskopem bakterie ogląda się po zabarwieniu.
Do barwienia stosuje się zwykle barwniki zasadowe lub czasami obojętne / kwaśne. Wynika to z budowy i składu chemicznego błony i ściany komórkowej i znacznej zawartości kwasów nukleinowych i białek w cytoplazmie (główne składniki pochłaniające…
…. przepuszczalności błony cytoplazmatycznej, w celu odróżnienia komórek żywych od martwych; wprowadza się nietoksyczny barwnik;
Metoda Grama - barwienie komórek fioletem krystalicznym, utrwaleniu płynem Lugola, odbarwieniu alkoholem i dobarwieniu barwnikiem kontrastującym;
Bakterie: - gramdodatnie - zatrzymują barwnik podstawowy (fiolet) po utrwaleniu płynem Lugola (roztwór jodu w jodku potasu, tworzy z fioletem kompleks) i nie odbarwiają się alkoholem; - gramujemne - nie zatrzymują kompleksu „fiolet - płyn Lugola”, odbarwiają się w alkoholu i przyjmują barwnik kontrastowy;
Kwasooporność - cecha charakterystyczna rodzaju Mycobacterium i niektórych promieniowców; za substancję warunkującą w największym stopniu uważa się kwas mykolowy występujący w ścianie i cytoplazmie; Wprowadzenie barwnika do komórek bakterii…
... zobacz całą notatkę
Komentarze użytkowników (0)